Prospecção das toxinas do veneno da aranha Phoneutria nigriventer

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dc.contributorPrograma de Pós-Graduação em Ciências – Toxinologia (PPGTox)pt_BR
dc.contributor.advisorTroncone, Lanfrancopt_BR
dc.contributor.authorSouza Junior, Tarcísio Liberato dept_BR
dc.date.accessioned2020-12-01T19:25:59Z-
dc.date.available2020-12-01T19:25:59Z-
dc.date.issued2013pt_BR
dc.date.submitted2013-
dc.identifier.citationSOUZA JUNIOR, Tarcísio Liberato de. Prospecção das toxinas do veneno da aranha Phoneutria nigriventer. 2013. 109 p. Dissertação (Mestrado em Ciências - Toxinologia) - Instituto Butantan, São Paulo, 2013.pt_BR
dc.identifier.citationSouza Junior TL. Prospecção das toxinas do veneno da aranha Phoneutria nigriventer [Toxin prospection in the Phoneutria nigriventer spider venom] [Master's thesis]. São Paulo: Instituto Butantan; 2013. 109 p. Portuguesept_BR
dc.identifier.urihttps://repositorio.butantan.gov.br/handle/butantan/3341-
dc.description.abstractVenoms of spiders pertaining to genus Phoneutria are complex mixtures capable of causing intense pain, spastic paralysis, autonomic dysfunction, convulsions, priapism, tachycardia, visual disturbances, fasciculation, itching and death. Several toxins are related to these effects and target many different receptors, representing an important source of new potential drugs for human and agricultural use. In this investigation crude venom was extracted, dried and stored at -20o C for investigation. Proteins were assayed by Bradford and nano-liter spectrophotometry. Electrophoretic profiling was performed with and without disulfide bond reduction. Bands obtained were cut off the gel and trypsin-digested as well as eluted and digested in solution for analysis by LC-MS/MS. Results were plotted against UNIPROT non-redundant database constrained to taxa Arachnida. Zimography evaluated proteolytic activity in the presence and absence of PMSF and EDTA demonstrating non- methalo- or serino-proteolytic activity in the range of 14kDa. Crude venom was fractionated by HPLC yielding 52 fractions. The positive identification of Tx2-6 and Tx3-4, both by pharmacological activity and MS suggested the integrity of the venom sample. Twenty of these fractions were toxic to mice i.p. injected. The usual signs were observed and these fractions were further submitted to HPLC purification. Only 21 of the more than 150 proteins estimated were identified in the database demonstrating that a more comprehensive proteomic approach is necessary.pt_BR
dc.description.sponsorshipConselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)pt_BR
dc.format.extent109 p.pt_BR
dc.language.isoPortuguesept_BR
dc.rightsOpen Accesspt_BR
dc.titleProspecção das toxinas do veneno da aranha Phoneutria nigriventerpt_BR
dc.title.alternativeToxin prospection in the Phoneutria nigriventer spider venompt_BR
dc.typeMaster's thesispt_BR
dc.subject.keywordPhoneutriapt_BR
dc.subject.keywordveneno de aranhapt_BR
dc.subject.keywordproteômicapt_BR
dc.subject.keywordpeptídeospt_BR
dc.subject.keywordbioprospecçãopt_BR
dc.subject.keywordspider venompt_BR
dc.subject.keywordproteomicspt_BR
dc.subject.keywordpeptidespt_BR
dc.subject.keywordbioprospectingpt_BR
dc.contributor.butantanTroncone, Lanfranco Ranieri Paolo|:Pesquisador|:Laboratório de Farmacologiapt_BR
dc.contributor.butantanSouza Júnior, Tarcísio Liberato|:Aluno|:Programa de Pós-Graduação em Ciências – Toxinologia (PPGTox)pt_BR
dc.sponsorship.butantanConselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)pt_BR
dc.identifier.bvsccBR78.1pt_BR
dc.identifier.bvsdbIBProdpt_BR
dc.degree.levelMestradopt_BR
dc.degree.grantorInstituto Butantanpt_BR
dc.degree.localSão Paulopt_BR
dc.degree.programPrograma de Pós-graduação em Ciências - Toxinologia (PPGTox)pt_BR
dc.description.abstractptVenenos de aranhas do gênero Phoneutria são complexos e causam efeitos locais e sistêmicos, tais como intensa dor, paralisia espástica, disfunção autonômica, convulsões, priapismo, taquicardia, disturbos visuais, fasciculação, prurido e morte. Esses efeitos são ocasionados por toxinas específicas, direcionadas contra uma grande variedade de alvos farmacológicos, fazendo delas importantes agentes no estudo de novas moléculas com potencial aplicação na medicina e agricultura. Nesse estudo, o veneno da aranha P. nigriventer foi extraído, desidratado e armazenado a -20°C até os procedimentos experimentais. A quantificação das proteínas no veneno bruto foi realizada utilizando o reagente de Bradfort e as frações obtidas por cromatografia foram quantificadas através de um espectrofotômetro de nano volume. O perfil eletroforético do veneno foi analisado com e sem redução das pontes dissulfeto. As bandas obtidas foram recortadas e submetidas ao procedimento de digestão tripsínica assim como em solução, e subsequente análise por cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massas (LC-MS/MS) para identificação das proteínas correspondentes e comparadas no banco de sequencias não redundante UNIPROT. A atividade proteolítica do veneno da aranha P. nigriventer foi avaliada pela técnica de zimografia sem inibidores ou com PMSF ou EDTA. Observamos proteases na faixa de 14 kDa com intensa atividade gelatinolítica mas sem as características de metaloproteinase ou serinoproteinase, que ainda não foram devidamente estudadas. Em busca por novas moléculas presentes neste veneno submetemos o veneno bruto a fracionamento por HPLC e cerca de 52 picos foram obtidos. Avaliamos a integridade do veneno identificando duas toxinas conhecidas, a Tx3-4 e a Tx2-6 por espectrometria de massas (LC/ESI-MS) e observação dos efeitos após injeção em camundongos. Das 52 frações analisadas, cerca de 20 frações demonstraram atividade tóxica. Diferentes sintomas foram observados como prostração, diarreia, diminuição dos reflexos, alterações respiratórias, ereção peniana, letargia, hipersalivação, convulsão, agitação extrema, paralisia dos membros posteriores e morte de alguns animais. Todas as frações ativas foram submetidas à análise por espectrometria de massas. Apenas 21 dos mais de 150 peptídeos estimados foram identificados no banco de dados, mostrando que uma análise proteômica abrangente ainde sa faz necessária.pt_BR
item.openairetypeMaster's thesis-
item.fulltextCom Texto completo-
item.grantfulltextopen-
item.languageiso639-1Portuguese-
crisitem.author.dept#PLACEHOLDER_PARENT_METADATA_VALUE#-
crisitem.author.orcid#PLACEHOLDER_PARENT_METADATA_VALUE#-
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