Clonagem e expressão de fragmentos de Fab em Escherichia coli.


Publication type
Academic monograph
Language
Portuguese
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Abstract
Introduction: Antibodies are made up of two light chains (LC) and two heavy chains (HC), linked together by disulfide bonds and divided into an antigen-binding region (Fab) and a crystallizable fragment (Fc). The interest in the production of antibody fragments, such as Fab, comes from the ability to recognize the antigen without activating antigen-dependent effector mechanisms and for studies on the structure of the antigen-antibody complex. Objective: Use a universal primer system to clone coding sequences from the human Fab region into a bacterial expression vector. Methods: The DNA of interest was cloned by amplification (PCR), purified, digested and cloned. Results: The primers correctly amplified the genes of interest. Conclusion: The use of a universal primer system allows the cloning of different sequences, regardless of the antibody target.
Abstract in Portuguese
Introdução: Anticorpossão formados por duas cadeiasleves (LC) e duas cadeias pesadas(HC), ligadas entre si por ligações dissulfeto e divididos por região de ligação ao antígeno (Fab) e fragmento cristalizável (Fc). O interesse na produção de fragmentos de anticorpos, como o Fab, vem da capacidade de reconhecer o antigênico sem ativar mecanismos efetores dependentes do antigênico e de estudos sobre a estrutura do complexo antigênico-anticorpo. Objetivo: Utilizar um sistema de primers universal para clonar sequências codificantes da região Fab humana em vetor de expressão bacteriano. Métodos: O DNA de interesse foi clonado por amplificação (PCR), purificação, digestão, ligação e transformação. Resultados: Os primers amplificaram corretamente os genes de interesse. Conclusão: A utilização de um sistema de primers universais permite a clonagem de diferentes sequências, independentemente do alvo do anticorpo.
Reference
Coelho, Victória Sanches. Clonagem e expressão de fragmentos de Fab em Escherichia coli. 2024. 40 p. Trabalho de Conclusão de Curso Biotecnologia para Saúde: Vacinas e Biofármacos – Escola Superior do Instituto Butantan, São Paulo, 2024.
Link to cite this reference
https://repositorio.butantan.gov.br/handle/butantan/5332
Issue Date
2024

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