Linhagem celular THP-1-NF-kB-GFP como modelo de ativação via sinalização de NF-kB para estudos de ação de toxinas de venenos

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Objective: This present work aimed to evaluate the activation of NF-kB in human monocyte THP-1 transfected with GFP cell line (THP-1-NFkB-GFP) aiming to evaluate the action of snake toxins on cell activation. Methods: To carry out this work, it was necessary to cultivate THP-1 and THP-1-NFkB-GFP cell lines in supplemented RPMI medium, Bothropstoxin-I and Bothropstoxin-II (BthTX-I and BthTX-II) isolation from Bothrops jararacussu venom by cation exchange chromatography analysis of the purity of the toxins carried out using the SDS-PAGE method, an analysis of the cytotoxic activity of BthTX-I and BthTX-II in THP-1-NFkB-GFP cell line using MTT method, and THP-1-NFkB-GFP cell activation, using LPS followed analysis by confocal microscope. Results: The toxins were successufully purifield to use in subsequent experiments. In citotoxicity assays it was verified that the toxins in the concentrations used did not induce the THP-1 death. Furthermore, the incubation of THP-1-NFkB-GFP with LPS was able to induce cell activation and GFP expression. Conclusion: In conclusion, THP-1 cells are activated via the NF-kB pathway by lipopolysaccharide (LPS).
Abstract in Portuguese
Objetivo: Este presente trabalho tem como propósito avaliar a ativação do NF-kB em monócitos humanos da linhagem THP-1 transfectado com a proteína GFP (THP-1- NFkB-GFP) para posterior estudo da ação de toxinas de serpentes sobre a ativação celular. Métodos: Para realização deste trabalho foram realizados o cultivo das linhagens de monócitos humanos THP-1 e THP-1-GFP em meio RPMI suplementado, a purificação de Bothropstoxina-I e Bothropstoxina-II (BthTX-I e BthTX-II) do veneno de Bothrops jararacussu pelo método de cromatografia de troca catiônica, confirmação da pureza das toxinas pelo método de SDS-PAGE, a análise da atividade citotóxica de BthTX-I e BthTX-II nas células THP-1-GFP pelo método de MTT, e ensaios de ativação das células THP-1-NFkB-GFP analisados em microscópio confocal. Resultados: As toxinas foram obtidas em pureza a quantidade para a realização dos experimentos. Nos ensaios de citotoxicidade foi determinado que as toxinas nas concentrações utilizadas não induziram a morte das células THP-1. Além disso, a incubação das células com LPS foi capaz ativar as células THP-1-NFkB-GFP expressar a GFP. Conclusão: Em conclusão as células THP-1 são ativadas pela via NF-kB por lipopolissacarídeo (LPS).
PINHEIRO, Karine Marinheiro. Linhagem celular THP-1-NF-kB-GFP como modelo de ativação via sinalização de NF-kB para estudos de ação de toxinas de venenos. 2024. 36 p. Trabalho de Conclusão de Curso (Especialização em Toxinas de Interesse em Saúde) – Escola Superior do Instituto Butantan, São Paulo, 2024.
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