Efeitos antitumorais do mastoparano e do peptídeo INKKI em modelos de melanomas experimentais “in vitro” e “in vivo”

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dc.contributorPrograma de Pós-Graduação em Ciências – Toxinologia (PPGTox)pt_BR
dc.contributor.advisorLebrun, Ivopt_BR
dc.contributor.authorAzevedo, Ricardo Alexandre dept_BR
dc.date.accessioned2020-08-04T19:44:02Z-
dc.date.available2020-08-04T19:44:02Z-
dc.date.issued2014pt_BR
dc.date.submitted2014pt_BR
dc.identifier.citationAZEVEDO, Ricardo Alexandre de. Efeitos antitumorais do mastoparano e do peptídeo INKKI em modelos de melanomas experimentais “in vitro” e “in vivo”. 2014. 208 p. Tese (Doutorado em Ciências - Toxinologia) - Instituto Butantan, São Paulo, 2014.pt_BR
dc.identifier.citationAzevedo RA. Efeitos antitumorais do mastoparano e do peptídeo INKKI em modelos de melanomas experimentais “in vitro” e “in vivo” [Antitumor effects of mastoparan and INKKI peptide on “in vitro” and “in vivo” experimental model melanoma] [Doctoral dissertation] São Paulo: Instituto Butantan; 2014. 208 p. Portuguesept_BR
dc.identifier.urihttps://repositorio.butantan.gov.br/handle/butantan/3104-
dc.description.abstractMastoparan (INLKALAALAKKIL) is a α-helical and amphipathic tetradecapeptide obtained from wasp venom Vespula lewissi. Casoparan is a cationic peptide (INKKI) originated from the hydrolysis of bovine β-casein, exhibit a motif homology with mastoparan. The aim of this study was to evaluate the effect in vitro and in vivo of mastoparan and INKKI on an experimental melanoma model. Cytotoxicity was evaluated on tumor or non-tumor lines by MTT assay. INKKI effects on growth kinetics, adhesion, migration and invasion assay on B16F10 cells were evaluated. Study of the cell cycle phases was analyzed by flow cytometry. Cell signaling was carried out by Western blotting. Metastatic and dorsal model in vivo tumor was standardized using C57BL/6 male mice and NOD/SCID/γcnull mice. Simultaneously, tumor cell death by apoptosis induced by mastoparan was determined using the Annexin V-FITC/PI assay.The loss of mitochondrial membrane potential (∆Ψm) was evaluated by cytometry on staining cells with TMRE probe. Generation of reactive oxygen species (ROS) was performed usingDHE probe. DNA fragmentation was evaluated by electrophoresis in an agarose gel and chromatin condensation was assessed by DAPI staining. In vivo study was performed on dorsal melanoma model. The results showed that mastoparan presented cytotoxic activity and INKKI exhibited antiproliferative effects. In addition, date showed that INKKI was able to inhibit growth kinetics, cell adhesion, invasion and migration. Complement, protein analyzes showed decrease of GSK3β, phosphor Src Tyr 416, phosphor FAK Tyr 925 and 397 levels. Cell cycle analysis showed that the INKKI was able arrest in the G0/G1phases and decreased the proportion of the S phase. These data were confirmed by Western blotting, showing that INKKI reduces of Cyclin D1 and D3, NFК-β and MAPK/Erk1/2 expression. Additionally, the treatment with INKKI induced reducing metastasis, inhibit of melanoma cutaneous growth, increase of survive rate and did not showed antitumor activity on immunocompromised mice. The results with 12 mastoparan showed that peptide was able to induce increase positive cells populations for annexin V. Furthermore, induced decrease of ∆Ψm, increased generation (ROS), induced DNA fragmentation and chromatin condensation. Also, mastoparan increases the expression of cleaved caspases-3, -9 and -12, PARP, Bim, Bak, Cytochrome c as well as decrease of expression of phospho Bad (S112), VDAC, PHB1 and Bcl-2. Most importantly, mastoparan reduced the growth of subcutaneous melanoma and increases of survive. In conclusion, mastoparan and INKK presents different mechanism action. Mastoparan induces apoptosis in melanoma cells through of intrinsic mitochondrial pathway and INKKI induces arrest cell cycle. We also demonstrated that INKKI has antimetastatic effects and inhibited growth of the volume tumor on melanoma cutaneous. Mastoparan presented therapeutic effects in vivo.pt_BR
dc.format.extent208 p.pt_BR
dc.language.isoPortuguesept_BR
dc.rightsOpen accesspt_BR
dc.titleEfeitos antitumorais do mastoparano e do peptídeo INKKI em modelos de melanomas experimentais “in vitro” e “in vivo”pt_BR
dc.title.alternativeAntitumor effects of mastoparan and INKKI peptide on “in vitro” and “in vivo” experimental model melanomapt_BR
dc.typeDoctoral dissertationpt_BR
dc.subject.keywordMastoparanopt_BR
dc.subject.keywordpeptídeo INKKIpt_BR
dc.subject.keywordefeito antitumoral in vivopt_BR
dc.subject.keywordparada do ciclo celularpt_BR
dc.subject.keywordapoptosept_BR
dc.subject.keywordMastoparanpt_BR
dc.subject.keywordINKKI peptidept_BR
dc.subject.keywordin vivo antitumor effectspt_BR
dc.subject.keywordcell cycle arrestpt_BR
dc.subject.keywordapoptosispt_BR
dc.contributor.butantanIvo Lebrun|:Pesquisador:Docente PPGTOX|:Laboratório de Bioquímicapt_BR
dc.contributor.butantanRicardo Alexandre de Azevedo|:Aluno|:Programa de Pós-Graduação em Ciências – Toxinologia (PPGTox)pt_BR
dc.identifier.bvsccBR78.1pt_BR
dc.identifier.bvsdbIBProdpt_BR
dc.degree.levelDoutoradopt_BR
dc.degree.grantorInstituto Butantanpt_BR
dc.degree.localSão Paulopt_BR
dc.degree.programPrograma de Pós-graduação em Ciências - Toxinologia (PPGTox)pt_BR
dc.description.abstractptO mastoparano (INLKALAALAKKIL) é um tetradecapeptídeo α-hélice e anfipático obtido do veneno da Vespula lewissi. O casoparano é um peptídeo catiônico (INKKI) isolado a partir da hidrólise da β-caseina bovina e apresenta motivo homólogo ao matoparano. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito antitumoral “in vitro” e “in vivo” do mastoparano e do INKKI em modelo de melanoma experimental. A viabilidade foi avaliada em linhagens tumorais e não tumorigênicas através do método MTT. Adicionalmente, os efeitos do INKKI foram avaliados sobre a cinética de crescimento, adesão, migração e invasão celular em culturas de B16F10. O estudo das fases do ciclo celular foi analisado por citometria de fluxo. A via de sinalização foi padronizada por Western blotting. Os modelos metastáticos e dorsais in vivo foram padronizados em animais C57BL/6 e em modelo NOD/SCID/γc null . Simultaneamente, a morte celular por apoptose induzida pelo mastoparano foi determinada pelo ensaio de Anexina V-FITC/PI. A perda do potencial de membrana mitocondrial (∆Ψm) foi avaliada por citometria em células marcadas com sonda TMRE. A geração da espécie reativa de oxigênio (ROS) foi padronizada usando a sonda DHE. A fragmentação do DNA foi avaliada por eletroforese em gel de agarose e a condensação da cormatina foi analisada pela marcação nuclear com DAPI. O estudo in vivo foi padronizado sobre o modelo de melanoma dorsal. Os resultados mostraram que o mastoparano apresentou atividade citotóxica e o INKKI apresentou atividade antiproliferativa. Em adição, os dados mostraram que o INKKI foi capaz de inibir o crescimento celular, a adesão, a migração e invasão. Em complemento, a análise das proteínas mostraram redução nos níveis de GSK3β, N-caderina, fosfo Src Tyr 416 e fosfo FAK Tyr 925 e 397. A análise do ciclo celular mostrou que peptídeo INKKI foi capaz de aumentar a porcentagem da população na fase G1 e diminuição da proporção da fase S. Esses dados foram confirmados por Western blotting onde o tratamento mostrou redução nos níveis das ciclinas D1, D3, NFк-β e Erk1/2. Adicionalmente, os resultados dos ensaios in vivo mostraram que o INKKI reduziu a formação de metástases, inibiu o crescimento do melanoma cutâneo, aumentou a taxa de sobrevida, porém, não apresentou efeito em camundongos imunocomprometidos. Os resultados com o mastoparano mostraram que o peptídeo foi capaz de induzir aumento da população de células positivas para Anexina V. Além disso, induziu diminuição do potencial de membrana mitocondrial, aumentou a geração de ROS, induziu fragmentação do DNA e condensação da cromatina. Também, o mastoprano aumentou a expressão das caspases clivadas 3, 9 e 12, PARP, Bim, Bak, citocromo c, bem como redução da expressão de fosfo BAD 10 (S112), VDAC, PHB1 e Bcl-XL. Mais importante, o mastoparano reduziu o crescimento do melanoma cutâneo e aumentou a sobrevida. Em conclusão, o mastorparano e INKKI apresentam diferentes mecanismos de ação. O mastoparano induz morte celular através da via mitocondrial intrínseca e o peptídeo INKKI induz parada no ciclo celular. Nós também demonstramos que o INKKI teve um efeito antimetastático e inibiu o volume tumoral in vivo. O mastoparano apresentou efeito terapêutico in vivo.pt_BR
item.languageiso639-1Portuguese-
item.fulltextCom Texto completo-
item.openairetypeDoctoral dissertation-
item.grantfulltextopen-
crisitem.author.dept#PLACEHOLDER_PARENT_METADATA_VALUE#-
crisitem.author.orcid#PLACEHOLDER_PARENT_METADATA_VALUE#-
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