Participação dos Receptores Purinérgicos na Ação Estimulatória da Crotoxina Sobre a Produção de Espécies Reativas do Oxigênio por Linhagem de Monócito Humano (THP-1).

A Crotoxina (CTX), toxina majoritária do veneno de serpente Crotalus durissus terrificus (VCdt) acarreta ação imunomoduladora, particularmente sobre a funcionalidade de macrófagos, células fundamentais para os mecanismos da defesa inata. Nestas células, é observado o dualismo na ação desta toxina, uma vez que foi observada tanto inibição de alguns parâmetros funcionais, como espraiamento e fagocitose, quanto à estimulação do “burst” respiratório (da geração de peróxido de hidrogênio-H2O2 e óxido nítrico-NO), da secreção de lipoxina A4 (LXA4) e seu análogo estável (15-Epi-LXA4) e do metabolismo de glicose e glutamina. Estudos recentes vêm demonstrando a importância dessas ações estimulatórias da CTX sobre o metabolismo de macrófagos para o controle da resposta inflamatória infecciosa e para a progressão tumoral. Ainda, receptores para peptídeo formil (Formyl Peptide Receptors-FPRs), ligantes de LXA4/15-Epi-LXA4 são cruciais para os diferentes efeitos da CTX sobre função e metabolismo de macrófagos. Apesar dessas evidencias não são conhecidos, na sua totalidade, os mecanismos envolvidos com as ações estimulatórias da CTX sobre o metabolismo destas células. Dentre os mecanismos envolvidos na regulação do metabolismo energético de macrófagos, a sinalização purinérgica é essencial na estimulação de secreção de citocinas e na geração de espécies reativas do oxigênio e do nitrogênio por macrófagos, além de serem receptores responsivos a estímulos via FPRs. Portanto, o objetivo do presente projeto foi investigar a possível participação dos receptores purinérgicos (RPs) sobre a produção de H2O2 por células monocíticas da linhagem THP-1, tratadas com CTX e se FPRs participam desta sinalização. Para tanto, foram utilizadas as células THP-1, como monócitos ou diferenciados em macrófagos ou estimulados por LPS. Os resultados mostram que os monócitos THP-1, como macrófagos diferenciados a partir de THP-1, por meio da incubação prévia com PMA, apresentaram aumento significativo da produção de H2O2 na presença das diferentes concentrações de CTX. O aumento da produção de H2O2 induzido pela CTX também foi observado após 24 horas, por macrófagos diferenciados e estimulados com LPS. Diferentes concentrações de CTX acarretam importante aumento de liberação de ATP por THP-1, na ausência ou presença de LPS. Ainda, as diferentes concentrações de CTX induziram aumento da visualização de receptores purinérgicos P2Y11 e FPRs em THP-1 estimuladas com LPS. O bloqueio dos receptores purinérgicos P2X e P2Y por antagonistas não seletivos aboliu a produção de H2O2 induzida pela CTX. O bloqueio dos FPRs pelo antagonista seletivo interferiu parcialmente com a produção deste reativo induzido pela toxina. Os resultados em conjunto demonstram, de maneira inédita, que monócitos humanos são responsivos à ação estimulatória da CTX sobre a produção de ROS e liberação de ATP e demonstram, pela primeira vez, que receptores purinérgicos estão envolvidos nesta ação estimulatória da CTX, com a participação dos FPRs.
Keywords
rotoxina;  Macrófago;  Células THP-1;  Peróxido de Hidrogênio;  ATP;  Receptores Purinérgicos;  Receptores para Peptídeos Formil;  Crotoxin;  Macrophage;  THP-1 Cells;  Hydrogen Peroxide;  Purinergic Receptors;  Formyl Peptide Receptors

Other Titles
Participation of Purinergic Receptors in the Stimulatory Action of Crotoxin on the Production of Reactive Oxygen Species by Human Monocyte (THP1
metadata.dc.contributor
metadata.dc.description.sponsorship
Document type
Thesis
Advisor
Sampaio, Sandra Coccuzzo
Level
Mestrado
Institution
Instituto Butantan
Place
São Paulo
Program
Programa de Pós-Graduação em Ciências – Toxinologia (PPGTOX)
Submission Date
2017
Metrics
Rights
Open Access
URI

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