Identificação e caracterização de novos criptídeos obtidos pela hidrólise da hemoglobina e suas atividades sobre a enzima conversora de angiotensina (EC 3.4.15.1) e a renina (EC 3.4.23.15)

Translated title
Identification and characterization of new cryptides obtained through the hydrolysys of hemoglobin and its activities on the angiotensin converting enzyme (EC 3.4.15.1) and renin (EC 3.4.23.15)

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Publication type
Master's thesis
Language
Portuguese
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Open Access
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Abstract
Cryptids are peptides with bioactive function that are hidden in other proteins, having similar or even different function from these mother proteins. The objective of this work is to analyze the generation of these cryptides from the hydrolysis of hemoglobin, which already has active peptides described as hemocidin, hemorphine and hemopressin, and to analyze their interaction with the enzymes ACE (Angiotensin Converting Enzyme) and Renin that are part of the system Renin- Angiotensin which is fundamental for cardio circulatory regulation. Hydrolysis of the hemoglobin was performed by trypsin, and the material was analyzed in SDS-Page and fractionated in High Pressure Liquid Chromatography. The mass of the peptides generated in LC-MS and in silico was determined. Preliminary tests were performed with ACE and the fractions, with results above 60% inhibition. The tests were redone in a fluorimetric assay again showing results above 60% inhibition in 4 fractions. The fluorimetric test was also used with the enzyme renin, with results around 20% inhibition. These same fractions were tested for MTT in fibroblast cell culture and no toxicity or proliferation was observed.
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Os criptídeos são peptídeos com função bioativa que se encontram ocultos em outras proteínas, tendo função semelhante ou até distinta dessas proteínas-mãe. O objetivo deste trabalho é analisar a geração destes criptídeos a partir da hidrólise de hemoglobina, que já possui peptídeos ativos descritos como a hemocidina, hemorfina e hemopressina, e analisar a interação deles com as enzimas ECA (Enzima Conversora de Angiotensina) e Renina que fazem parte do sistema Renina- Angiotensina que é fundamental na regulação cardiocirculatória. Para isso foi realizada uma hidrólise da hemoglobina por tripsina, sendo esse material analisado em SDS-PAGE e fracionado em Cromatografia Líquida de Alta Pressão. Foi determinada a massa dos peptídeos gerados em LC-MS e in silico. Foram realizados testes preliminares com a ECA e as frações, tendo resultados acima de 60% de inibição. Os testes foram refeitos em ensaio fluorimétrico apresentando novamente resultados acima de 60% de inibição diante 4 frações. O teste fluorimétrico foi usado também com a enzima renina, apresentando resultados em torno de 20% de inibição. Essas mesmas frações foram testadas por MTT em cultura celular de fibroblastos e não foi notada toxicidade ou proliferação.
Reference
RODRIGUES, Yacov Raphael do Rêgo. Identificação e caracterização de novos criptídeos obtidos pela hidrólise da hemoglobina e suas atividades sobre a enzima conversora de angiotensina (EC 3.4.15.1) e a renina (EC 3.4.23.15). 2018. 46 p. Dissertação (Ciências-Toxinologia), Instituto Butantan, São Paulo, 2018
Rodrigues YRR. Identificação e caracterização de novos criptídeos obtidos pela hidrólise da hemoglobina e suas atividades sobre a enzima conversora de angiotensina (EC 3.4.15.1) e a renina (EC 3.4.23.15) [Identification and characterization of new cryptides obtained through the hydrolysys of hemoglobin and its activities on the angiotensin converting enzyme (EC 3.4.15.1) and renin (EC 3.4.23.15)] [Master's thesis]. São Paulo: Instituto Butantan; 2018. 46 p. Portuguese
Link to cite this reference
https://repositorio.butantan.gov.br/handle/butantan/3610
Issue Date
2018


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