Análise dos constituintes de baixa massa molecular no veneno de Lachesis muta

Translated title
Analysis of low molecular mass constituents in the venom of Lachesis muta

Publication type
Academic monograph
Language
Portuguese
Access rights
Open Access
Abstract
Snakebite accidents are a serious public health problem neglected in tropical countries. In Brazil, the Northern Region has the largest number of cases and snakes from Lachesis genus are responsible for the most serious accidents and the highest number of deaths. Victims of Lachesis envenoming have bite site damage, bleeding and, in severe cases, hypotension. Proteomic and transcriptomic studies report the presence of bradykinin potentiating peptide (BPPs) in L. muta venom, however, there are no data in the literature describing their purifications and identifications. The objective of this work is to identify and characterize angiotensin-converting enzyme inhibitors in the low molecular weight portion of Lachesis muta venom. For this lyophilized L. muta venom was dissolved in ammonium acetate buffer and filtered by centrifugation for size fractionating, using a 10 kDa centrifugal filter unit. The low molecular weight fraction was then chromatographed by RP-HPLC using a C18 column. Twelve fractions were collected and four were tested in fluorimetric assays using ACE as an enzyme and Abz-FRK(Dnp)P-OH as substrate. These fractions present peaks with retention time similar to the peaks that contained BPPs of other snake venoms. In addition, four fractions presented 100% inhibition of the catalytic activity of ACE over the FRET substrate. Based on these results, and due to other data in the literature describing the presence of BPPs in L. muta venom, is possible that it may contain BPPs. For confirmation of this hypothesis, the next step will be to perform analysis by mass spectrometry aiming to determine the primary sequences of the peptides present in each fraction.
metadata.dc.description.abstractpt
Os acidentes ofídicos são um grave problema de saúde pública negligenciado em países tropicais. No Brasil, a Região Norte apresenta o maior número de casos e as serpentes do gênero Lachesis são responsáveis pelos acidentes mais graves e com maior número de óbitos. Vítimas do envenenamento por Lachesis apresentam danos no local da picada, hemorragias e em casos graves apresentam hipotensão arterial. Estudos proteômicos e trancriptômicos descrevem a presença de peptídeos potenciadores de bradicinina (BPPs) no veneno de Lachesis muta, porém não há dados na literatura descrevendo o isolamento e/ou suas identificações. O objetivo deste trabalho é identificar e caracterizar inibidores da enzima conversora de angiotensina (ECA) na porção de baixa massa molecular do veneno de Lachesis muta. Para isso o veneno liofilizado de Lachesis muta foi dissolvido em tampão acetato de amônio e filtrado por centrifugação para o fracionamento de tamanho, usando uma membrana de corte de 10 kDa. A porção de baixa massa molecular foi fracionada por RP-HPLC usando uma coluna C-18. Doze frações foram coletadas e quatro foram testadas em ensaios fluorimétricos utilizando a ECA como enzima e o Abz-FRK(Dnp)P-OH como substrato. Das quatro frações selecionadas, duas se destacaram devido à alta intensidade dos picos, um em 13,65 minutos de retenção e outro em 14 minutos de retenção, com 44% e 45% concentração de solução B, respectivamente. As frações de interesse apresentam picos eluídos nos mesmos tempos de retenção que os BPPs de outros venenos de serpentes, sugerindo, juntamente com dados da literatura, que eles podem conter BPPs semelhantes. As quatro frações inibiram em 100% a atividade catalítica da ECA sobre o substrato Abz-FRK(Dnp)P-OH. Por essas razões e devido outros dados na literatura descreverem a presença BPPs no veneno de L. muta, acreditamos que as quatro frações selecionadas contenham BPPs. Para a confirmação o próximo passo será realizar a análise por espectrometria de massas.
Reference
SILVA, Lais Gomes da. Análise dos constituintes de baixa massa molecular no veneno de Lachesis muta. 2020. 31 p. Trabalho de Conclusão de Curso (Especialização em Toxinas de Interesse em Saúde) – Centro de Formação de Recursos Humanos para o SUS/SP; Instituto Butantan, São Paulo, 2020.
Link to cite this reference
https://repositorio.butantan.gov.br/handle/butantan/3749
Issue Date
2020

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