Clonagem e expressão de uma proteína rica em cisteína (CRISP) isolada da glândula de veneno da centopeia Cryptops iheringi

Centopeias da classe Chilopoda constituem um grupo de artrópodes sinantrópicos com ampla distribuição global que estão envolvidos em vários relatos de humanos mordidos. Grande parte dos acidentes no estado de São Paulo tem sido relacionada às centopeias dos gêneros Cryptops e Otostigmus. O veneno desses animais contém vários compostos bioativos e dentre eles, as proteínas secretórias ricas em cisteína (CRISPs) que são conhecidas como alérgenos. Embora as CRISPs já tenham sido descritas em transcrições da glândula de veneno em artrópodes, suas ações no veneno ainda permanecem desconhecidas. Portanto, a obtenção de uma dessas proteínas em forma recombinante pode ajudar a entender seu mecanismo de ação. Este presente trabalho tem como propósito clonar uma CRISP isolada da glândula de veneno de C. iheringi e expressá-la em um sistema bacteriano com o objetivo de avaliar sua atividade biológica. A partir das transcrições da glândula C. iheringi, a sequência CRISP foi isolada e usada para síntese de um gene sintético. Uma vez obtida, a sequência genética foi subclonada no vetor pSUMOulp1. A expressão bacteriana foi estabelecida utilizando-se a E. coli BL21 (DE3)-Star cultivada a 30 ° C por 16 horas com indução de IPTG em OD600=0,6 . Embora uma grande parte tenha sido obtida na forma de corpos de inclusão, foi possível purificar uma pequena quantidade dessa proteína na forma solúvel, e posteriormente foi purificada por cromatografia de afinidade e avaliada por gel SDS-PAGE e Western blotting. Esta proteína será posteriormente utilizada para determinação de sua atividade biológica. Este estudo pode contribuir para elucidar as atividades biológicas e processos patológicos causados por essa proteína no envenenamento, e assim, pela primeira vez, descrever a atividade desse tipo de toxina para essa classe de veneno.