Anticorpos monoclonais Anti-Pneumolisina e anti-PspA de Pneumococo como marcadores em teste imunocrotográfico rápido para detecção de Streptococus Pneumoniae


Abstract
Streptococcus pneumonia is an important human pathogen, which causes invasive pneumococcal diseases including pneumonia, meningitis and bloodstream infections. Responsible for high rates of child morbidity and mortality, especially in developing countries. Early diagnosis is important to lead an appropriate treatment. Strip-based immunochromatographic tests, or dipstick tests are fast, cheap, have good specificity, simple interpretation and performance. Thus, they correspond to the great alternative to conventional tests, especially in developing countries. This kind of test intends to detect the presence or absence of target analytes, such as bacterial antigens. In this study, monoclonal antibodies and conjugation methods were evaluated with two colored markers: dyed colloidal microspheres with carboxyl groups on their surface and colloidal gold nanoparticles. Monoclonal antibodies chose for conjugation were anti-pneumolysin (Ply) and anti-pneumococcus surface protein A (PspA). Anti-Ply polyclonal sera and anti-whole cell pneumococcal vaccine (WCPV) were used as capture antibodies. The best results were obtained with colloidal gold nanoparticles, in which bacterial antigens were detected in bacterial 107 a 104 CFU/mL samples and culture supernatant of S. pneumoniae serotype 9V, one of the most prevalent serotypes. The results were obtained between 10-20 minutes. The assessed dipstick can be considered as a promising sensitive and fast detection tool for antigens of S. pneumoniae
Abstract in Portuguese
Streptococcus pneumoniae é um importante patógeno humano, causador de doenças pneumocócicas invasivas que incluem pneumonia, meningite e bacteremia. Responsável por alta taxa de morbimortalidade infantil, sobretudo em países em desenvolvimento. O diagnóstico rápido é importante para condução de tratamento adequado. Testes imunocromatográficos baseados em tira, ou testes de dipstick são rápidos, baratos, têm boa especificidade, dotados de simples interpretação e realização. Dessa forma, correspondem a ótima alternativa a testes convencionais, principalmente em países em desenvolvimento. Detectam a presença ou ausência de analitos alvos, como antígenos bacterianos. Neste estudo, foram avaliados anticorpos monoclonais e métodos de conjugação com dois marcadores coloridos: microesferas coloidais coloridas com grupos carboxila em sua superfície e nanopartículas de ouro coloidal. Os anticorpos monoclonais escolhidos para conjugação foram anti-pneumolisina (Ply) e anti-proteína A de superfície de pneumococo (PspA). Foram utilizados como anticorpos de captura soros policlonais anti-Ply e anti-vacina pneumocócica celular (WCPV). A melhor conjugação foi obtida com nanopartículas de ouro coloidal, com detecção de antígenos bacterianos presentes em amostras bacterianas 107 a 104 UFC/mL, e em sobrenadante de cultivo de S. pneumoniae sorotipo 9V, um dos sorotipos mais prevalentes. Os resultados foram obtidos em 10-20 minutos. O dipstick avaliado pode ser considerado promissora ferramenta de detecção sensível e rápida de antígenos de S. pneumoniae.
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https://repositorio.butantan.gov.br/handle/butantan/3773
Issue Date
2019


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