Análise de viabilidade celular em linhagem RPE - 1 para teste de toxicidade do veneno de Bothrops jararaca (Wied - Neuwied, 1824)


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Publication type
Academic monograph
Language
Portuguese
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Abstract
Snake envenomation is classified by the WHO as a neglected tropical disease. Since 2019, due to the 138,000 deaths/year, it has become a target of the organization's plan to reduce deaths and disability. In Brazil, Bothrops jararaca is responsible for 86.8% of accidents, being the subject of many studies to better understand the mechanisms of action of its venom. Toxicity testing commonly involves the use of animal models. Created in 1959, the 3 R’s principle aims to reduce, refine and replace the use of animals with alternative methods with equivalent results. Based on this premise, the objective of this work was to evaluate the toxicity of B. jararaca venom in cell culture as an alternative or complement to toxicity tests performed on animals, aiming at a greater alignment with the 3 R’s principle. RPE-1 cells (15.000 cells/well) were treated with B. jararaca venom between 0.1 μg/mL to 200 μg/mL for 24 h, cell viability and IC50 were calculated by MTT colorimetric assay. Five initial trials established optimal venom concentrations between 10 μg/mL and 200 μg/mL. The results indicated a dose-dependent decrease in cell viability, with a significant drop from 50 μg/mL, presenting viability of 70% and decreasing up to 7% at 200 μg/m. The IC50 calculation resulted in 75.20 μg/mL In conclusion, the work showed that the use of cell culture to analyze cell viability through the MTT test represents an effective method for obtaining data on the cytotoxicity of B. jararaca venom, contributing to the development of alternative methods to the use of animals, according to the principle of the 3 R’s.
Abstract in Portuguese
O envenenamento por serpentes é classificado pela OMS como uma doença tropical negligenciada. Desde 2019, devido às 138.000 mortes/ano, tornou-se alvo do plano da organização para redução de mortes e invalidez. No Brasil, a espécie Bothrops jararaca é responsável por 86,8% dos acidentes, sendo alvo de muitos estudos para melhor compreensão dos mecanismos de ação de seu veneno. Testes de toxicidade comumente envolvem o uso de modelos animais. Criado em 1959, o princípio dos 3 R’s visa reduzir, refinar e substituir o uso de animais por métodos alternativos com resultados equivalentes. Partindo dessa premissa, o objetivo deste trabalho foi avaliar a toxicidade do veneno de B. jararaca em cultura celular como alternativa ou complemento aos testes de toxicidade realizados em animais, visando um maior alinhamento com o princípio dos 3 R’s. Células RPE-1 (15.000 células/poço) foram tratadas com veneno de B. jararaca entre 0,1 μg/mL a 200 μg/mL por 24 h, a viabilidade celular e o IC50 foram calculados através do ensaio colorimétrico de MTT. Cinco ensaios iniciais estabeleceram as concentrações ideais do veneno entre 10 μg/mL e 200 μg/mL. Os resultados indicaram uma diminuição dose-dependente de viabilidade celular, com queda significativa a partir de 50 μg/mL, apresentando viabilidade de 70% e decaindo até 7% em 200 μg/m. O cálculo do IC50 resultou em 75,20 μg/mL Em conclusão, o trabalho mostrou que o uso da cultura celular para análise da viabilidade celular através do teste de MTT representa um método eficaz na obtenção de dados sobre citotoxicidade do veneno de B. jararaca, contribuindo para o desenvolvimento de métodos alternativos ao uso de animais, segundo o princípio dos 3 R’s.
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https://repositorio.butantan.gov.br/handle/butantan/4189
Issue Date
2022


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