Caracterização bioquímica de uma serinoprotease com efeito ativador do plasminogênio do veneno de Lachesis muta  rhombeata

Santos, Gustavo Oliveira

Caracterização bioquímica de uma serinoprotease com efeito ativador do plasminogênio do veneno de Lachesis muta rhombeata

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Campo DC	Valor	idioma
dc.contributor	Programa de Pós-Graduação em Ciências – Toxinologia (PPGTox)	pt_BR
dc.contributor.advisor	Sanchez, Eladio Oswaldo Flores	pt_BR
dc.contributor.author	Santos, Gustavo Oliveira	pt_BR
dc.date.accessioned	2023-12-18T18:38:47Z	-
dc.date.available	2023-12-18T18:38:47Z	-
dc.date.issued	2022	pt_BR
dc.date.submitted	2022-08-10	-
dc.identifier.uri	https://repositorio.butantan.gov.br/handle/butantan/5208	-
dc.description.abstract	Snake venom serine proteases (SVSPs) are chymotrypsin-like proteins found in some venoms of the Viperidae family. These enzymes affect physiological processes of their prey and victims, acting mainly in the hemostatic, fibrinolytic and kinin systems. SVSPs belong to the PA clan, PA (S) subclan, S1 family and A subfamily of proteolytic enzymes. This work, describes a SVSP (Lmr-PA) isolated from the venom of Lachesis muta rhombeata which activates plasminogen. The proteinase was purified by combination of gel filtration and anionic exchange chromatographies. Its homogeneity was demonstrated by SDS-PAGE, reverse-phase HPLC, and two-dimensional electrophoresis. Lmr-PA is a 30-kDa single chain glycoprotein. Its amino acid sequence (61%) was determined by mass spectrometry on nLC-MS/MS. Lmr-PA activates plasminogen to release plasmin and degrades the plasmin substrate S-2251 as well as dimethylcasein. PMSF, the specific inhibitor of serine proteases completely blocked Lmr-PA activity. The proteinase cleaves the Aα chain and partially the Bβ and γ chains of fibrinogen. In addition the protease degrades laminin, nidogen and type IV collagen from Matrigel. The enzyme digests fibrin in presence of plasminogen in vitro. Deglycosylated Lmr-PA loses approximately 26% of its activity. In addition, Lmr-PA activity is inhibited by α2-macroglobulin at a ratio of 2:1 (α2-M:E) and α2-antiplasmin inhibits plasmin generated from plasminogen. Lmr-PA does not induce aggregation of washed human platelets but, aggregates platelets in presence of exogenous fibrinogen and binds to the platelet receptors glycoproteins (GP) GPIb and GPVI. Our data indicate that Lmr-PA is a plasminogen activating serine protease, like to previously reported LV-PA from Lachesis muta muta venom. These results suggested that Lmr- PA play a role in the pathology of snake envenomation and could be a useful model to study hemostatic disorders caused by snake bites.	pt_BR
dc.description.sponsorship	(CNPq) Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico	pt_BR
dc.description.sponsorship	(FAPEMIG) Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais	pt_BR
dc.description.sponsorship	(CAPES) Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior	pt_BR
dc.description.sponsorship	(FAPESP) Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo	pt_BR
dc.format.extent	140 p.	pt_BR
dc.language.iso	Portuguese	pt_BR
dc.rights	Restricted access	pt_BR
dc.title	Caracterização bioquímica de uma serinoprotease com efeito ativador do plasminogênio do veneno de Lachesis muta rhombeata	pt_BR
dc.type	Master thesis	pt_BR
dc.subject.keyword	Serinoprotease	pt_BR
dc.subject.keyword	Lachesis muta rhombeata	pt_BR
dc.subject.keyword	hemostasia	pt_BR
dc.subject.keyword	fibrinólise	pt_BR
dc.subject.keyword	toxinologia	pt_BR
dc.subject.keyword	Serine protease	pt_BR
dc.subject.keyword	hemostasis	pt_BR
dc.subject.keyword	fibrinolysis	pt_BR
dc.subject.keyword	toxinology	pt_BR
dc.contributor.butantan	Santos, Gustavo Oliveira\|:Aluno\|:Programa de Pós-Graduação em Ciências – Toxinologia (PPGTox)	pt_BR
dc.sponsorship.butantan	(CNPq) Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico¦¦	pt_BR
dc.sponsorship.butantan	(FAPEMIG) Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais¦¦	pt_BR
dc.sponsorship.butantan	(CAPES) Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior¦¦	pt_BR
dc.sponsorship.butantan	(FAPESP) Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo¦¦	pt_BR
dc.identifier.bvscc	BR78.1	pt_BR
dc.identifier.bvsdb	IBProd	pt_BR
dc.degree.level	Mestrado	pt_BR
dc.degree.grantor	Instituto Butantan	pt_BR
dc.degree.local	São Paulo	pt_BR
dc.degree.program	Programa de Pós-Graduação em Ciências – PPGTox	pt_BR
dc.description.abstractpt	As serinoproteases do veneno de serpentes (SVSPs) são proteínas semelhantes à quimotripsina presentes encontradas em alguns venenos da família Viperidae. Essas enzimas afetam os processos fisiológicos de suas presas e vítimas, atuando principalmente nos sistemas hemostático, fibrinolítico e cinina. As SVSPs pertencem ao clã PA, subclan PA (S), família S1 e subfamília A de enzimas proteolíticas. Este trabalho descreve uma SVSP (Lmr-PA) isolada do veneno de Lachesis muta rhombeata que ativa o plasminogênio. A proteinase foi purifica por combinação de cromatografias de filtração em gel e troca aniônica. Sua homogeneidade foi demonstrada por SDS-PAGE, HPLC de fase reversa e eletroforese bidimensional. Lmr-PA é uma glicoproteína de cadeia simples de 30 kDa. A sua sequência de aminoácidos (61%) foi determinada por espectrometria de massa em nLC-MS/MS. Lmr-PA ativa o plasminogênio para liberar plasmina e degrada o substrato de plasmina S-2251, bem como a dimetilcaseína. PMSF, um inibidor específico de serinoproteases bloqueou completamente a atividade da Lmr-PA. A proteinase cliva a cadeia Aα e parcialmente as cadeias Bβ e γ do fibrinogênio. Além disso, a protease degrada laminina, nidogênio e colágeno tipo IV de Matrigel. A enzima digere a fibrina na presença de plasminogênio in vitro. Lmr-PA desglicosilada perde aproximadamente 26% da sua atividade. Além disso, a atividade da Lmr-PA é inibida pela α2-macroglobulina em uma proporção de 2:1 (α2-M:E) e a α2-antiplasmina inibe a plasmina gerada a partir do plasminogênio. Lmr-PA não induz a agregação de plaquetas humanas lavadas, mas agrega plaquetas na presença de fibrinogênio exógeno e se liga às glicoproteínas dos receptores plaquetários (GP) GPIb e GPVI. Nossos dados indicam que a Lmr-PA é uma serinoprotease ativadora do plasminogênio semelhante a LV-PA relatada anteriormente do veneno de Lachesis muta muta. Esses resultados sugerem que a Lmr-PA desempenha um papel na patologia do envenenamento por serpentes e pode ser um modelo útil para estudar distúrbios hemostáticos causados por acidentes ofídicos.	pt_BR
dc.description.internal	Embargo: 12 meses	pt_BR
item.fulltext	Sem Texto completo	-
item.openairetype	Master thesis	-
item.languageiso639-1	Portuguese	-
item.grantfulltext	none	-
crisitem.author.dept	#PLACEHOLDER_PARENT_METADATA_VALUE#	-
crisitem.author.orcid	#PLACEHOLDER_PARENT_METADATA_VALUE#	-
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