Estratégias de clonagem de proteínas de alta massa molecular: α-hemolisina e CNF1 produzidas por Escherichia coli uropatogênica como modelos

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Campo DCValoridioma
dc.contributorPrograma de Pós-Graduação em Ciências – Toxinologia (PPGTox)pt_BR
dc.contributorLab. Bacteriologiapt_BR
dc.contributor.advisorPiazza, Roxane Maria Fontespt_BR
dc.contributor.authorCaetano, Bruna De Luccapt_BR
dc.date.accessioned2024-06-27T11:38:22Z-
dc.date.available2024-06-27T11:38:22Z-
dc.date.issued2023pt_BR
dc.date.submitted2021-04-08-
dc.identifier.citationCaetano, Bruna De Lucca. Estratégias de clonagem de proteínas de alta massa molecular: α-hemolisina e CNF1 produzidas por Escherichia coli uropatogênica como modelos. 2021. 145 f. Tese (Ciências-Toxinologia). Instituto Butantan, São Paulo, 2021.pt_BR
dc.identifier.urihttps://repositorio.butantan.gov.br/handle/butantan/5393-
dc.description.abstractUropathogenic Escherichia coli (UPEC) is the main cause of urinary tract infection (UTI). Among the virulence factors produced by UPEC, alpha hemolysin (HlyA) and cytotoxic necrotizing factor 1 (CNF1) stand out. Keeping in mind that up to 60% of UPEC strains produce HlyA and about 40% express CNF1, these toxins become good targets for diagnosis and therapeutic interventions. The importance of HlyA and CNF1 toxins in the cases of UTI caused by UPEC and the enormous challenges in the production of recombinant proteins, led to this work proposal to obtain different structural forms of these toxins through the methodology of cloning and heterologous expression, of integral toxins, low molecular mass and intermediate immunogenic toxins. Different structural forms of these high molecular weight toxins have been proposed, from which the production integrates to low molecular weight proteins. Recombinant toxins were analyzed in silico, expressed and purified. Among the cloning and expression approaches, we highlight for HlyA the strategy to obtain the intermediate immunogen of this toxin. For CNF1, both the construction of the full protein and the recombinant protein using only its catalytic portion. In addition, a bacterial collection of UPEC was analyzed to define local epidemiological data on the prevalence of toxin genes and the ability to cause hemolysis and multinucleation. The hlyA and cnf1 genes were present in the isolates in 36% and 23%, respectively, and the hemolysis phenotype occurred in 33% and the multinucleation in 23% of the bacterial isolates.pt_BR
dc.description.sponsorship(CAPES) Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superiorpt_BR
dc.format.extent146 p.pt_BR
dc.language.isoPortuguesept_BR
dc.rightsOpen accesspt_BR
dc.titleEstratégias de clonagem de proteínas de alta massa molecular: α-hemolisina e CNF1 produzidas por Escherichia coli uropatogênica como modelospt_BR
dc.typeDoctoral thesispt_BR
dc.subject.keywordtoxinas bacterianaspt_BR
dc.subject.keywordEscherichia coli uropatogênicapt_BR
dc.subject.keywordalfa-hemolisinapt_BR
dc.subject.keywordfator necrosante citotóxicopt_BR
dc.subject.keywordproteína de alta massa molecularpt_BR
dc.subject.keywordBacterial toxinspt_BR
dc.subject.keyworduropathogenic Escherichia colipt_BR
dc.subject.keywordalpha-hemolysinpt_BR
dc.subject.keywordcytotoxic necrotizing factor,pt_BR
dc.subject.keywordhigh molecular weight proteinpt_BR
dc.contributor.butantanCaetano, Bruna De Lucca|:Pesquisador|:Programa de Pós-Graduação em Ciências – Toxinologia (PPGTox)pt_BR
dc.sponsorship.butantan(CAPES) Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior¦¦001pt_BR
dc.identifier.bvsccBR78.1pt_BR
dc.degree.levelDoutoradopt_BR
dc.degree.grantorInstituto Butantanpt_BR
dc.degree.localSão Paulopt_BR
dc.degree.programPrograma de Pós-Graduação em Ciências – PPGToxpt_BR
dc.description.abstractptEscherichia coli uropatogênica (UPEC) é a principal causa de infecção do trato urinário (ITU). Entre os fatores de virulência produzidos pela UPEC, destacam- se a alfa hemolisina (HlyA) e o fator necrosante citotóxico 1 (CNF1). Tendo em vista que até 60% das cepas de UPEC produzem HlyA e cerca de 40% expressam CNF1, estas toxinas se tornam bons alvos para o diagnóstico e intervenções terapêuticas. A importância das toxinas HlyA e CNF1 nos casos de ITU causados por UPEC e os enormes desafios na produção de proteínas recombinantes, levou a este trabalho que se propôs a obter diferentes formas estruturais destas toxinas pela metodologia de clonagem e expressão heteróloga. Diferentes formas estruturais destas toxinas de alta massa molecular foram propostas, deste a produção integra a proteínas de baixo peso molecular. As toxinas recombinantes foram analisadas in silico, expressas e purificadas. Dentre as abordagens de clonagem e expressão destacamos para HlyA a estratégia de obtenção do imunógeno intermediário dessa toxina. Já para CNF1, tanto a construção da proteína integra quanto a proteína recombinante utilizando apenas sua porção catalítica. Além disso, analisou-se uma coleção bacteriana de UPEC para definir dados epidemiológicos locais da prevalência dos genes das toxinas e capacidade de causar hemólise e multinucleação. A genes hlyA e cnf1 estavam presentes nos isolados em 36% e 23%, respectivamente e o fenótipo de hemólise ocorreu em 33% e a multinucleação em 23% dos isolados bacterianos.pt_BR
item.fulltextCom Texto completo-
item.openairetypeDoctoral thesis-
item.languageiso639-1Portuguese-
item.grantfulltextopen-
crisitem.author.dept#PLACEHOLDER_PARENT_METADATA_VALUE#-
crisitem.author.orcid#PLACEHOLDER_PARENT_METADATA_VALUE#-
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