Avaliação do bloqueio de transportadores de ácidos graxos no metabolismo de L. interrogans por anticorpos policlonais

A leptospirose é uma zoonose emergente amplamente distribuída de interesse humano e veterinário. Em áreas urbanas, os roedores desempenham o papel de principais reservatórios da doença por permitirem a colonização das bactérias do gênero Leptospira nos túbulos renais proximais e as excretarem vivas na urina. Em decorrência do amplo espectro de sintomas que o paciente pode apresentar, aliado a um ineficiente diagnóstico da doença, o número de casos no mundo permanece subestimado. Não há vacina eficaz até o momento. A identificação de proteínas da membrana externa conservadas entre estirpes patogênicas são os principais alvos de pesquisa para elucidar os mecanismos de patogenicidade. Deste modo, diversos estudos têm buscado caracterizar e identificar as proteínas de superfície que sejam antigênicas e presentes nos diversos sorovares de L. interrogans. A partir do genoma sequenciado de L. interrogans, o gene LIC12524 foi analisado in silico apresentando uma conformação de β-barril, com uma região transmembrana. Foram criadas duas construções de partes da proteína escolhidas com base em seus epítopos ligantes de célula B, EP1 e EP2. Os genes foram amplificados e clonados no vetor pAE. As proteínas EP1 e EP2 foram purificadas a partir da fração solúvel e insolúvel, respectivamente, por cromatografia de afinidade com metal. As proteínas recombinantes foram inoculadas em camundongos para avaliação da sua atividade imunogênica e obtenção de soros imunes. Estes soros foram avaliados quanto à reatividade com anticorpos em soros de pacientes diagnosticados com a doença, onde se mostraram reativos, porém pouco imunogênicos. Os resultados da qPCR, comparando a expressão da proteína em cepas virulenta e atenuada, mostraram que a expressão relativa foi aproximadamente 45 vezes mais alta na cepa virulenta.