Ensaios de degradação forçada e degradação em plasma sanguíneo de peptídeos intracelulares com potencial para composição farmacológica

Translated title
Forced degradation and blood plasma degradation tests on intracellular peptides with potential for drug composition.Forced degradation and blood plasma degradation tests on intracellular peptides with potential for drug composition

Publication type
Academic monograph
Language
Portuguese
Access rights
Open Access
Abstract
Several proteins that act in the control of the cell cycle are degraded by the ubiquitin proteasome system UPS. Among them, cyclin D2, which is the precursor protein of pep5, an intracellular peptide with potential for the pharmacological composition of antitumor drugs and in combating Chagas disease. Previous studies have characterized pep5 and its minimal sequence with pharmacological action, that is, the smallest portion of the molecule without losing its therapeutic effect. The objective of this work was accomplishing tests to understand the stability profile of this promising molecule and its minimum sequence with six residues (pep5r) with pharmacological action. For this, we employ a method of forced degradation analysis in which we promote stressful situations, such as oxidation, temperature and hydrolysis to determine the degradation times under common conditions during the conditioning and transport of these peptides, in addition to these experiments, we carried out a profile study degradation of peptides in interaction with human blood plasma. The results showed that pep5r is more stable than pep5 among the parameters analyzed, in addition, pep5 was more susceptible to modification by hydrolysis in alkaline media. Both peptides did not undergo thermal modification at 37 ° for 4 hours of incubation, requiring a prolonged study or with higher temperature values to promote degradation. The degradation tests in plasma showed that pep5 is not whole after 15 minutes in interaction with human blood plasma, in contrast, the mass of pep5r was found throughout the analysis period. Therefore, we conclude that although the experiments were carried out with only one sample, the results enabled us to construct initial ideas about some characteristics related to the stability of these peptides, either by environmental actions or degradation in blood plasma. Furthermore, all the initial tests carried out in this work provide guidance for future tests aiming at an eventual pharmacological record of the peptides in question.
Abstract in Portuguese
Diversas proteínas que atuam no controle do ciclo celular são degradadas pelo sistema ubiquitina proteossoma (UPS). Dentre elas, a ciclina D2, que é a proteína precursora do pep5, um peptídeo intracelular com potencial para composição farmacológica de medicamentos antitumorais e no combate à doença de chagas. Estudos anteriores caracterizaram o pep5 e sua mínima sequência com ação farmacológica, ou seja, a menor porção da molécula sem que ela perca seu efeito terapêutico. O objetivo deste trabalho foi realizar ensaios para compreender o perfil de estabilidade dessa promissora molécula e de sua mínima sequência com seis resíduos (pep5r) com ação farmacológica. Para isso, empregamos um método de análise de degradação forçada em que promovemos situações de estresse, como oxidação, temperatura e hidrólise para determinar os tempos de degradação em condições comuns durante o acondicionamento e transporte desses peptídeos, além desses experimentos, realizamos um estudo do perfil degradação dos peptídeos em interação com o plasma sanguíneo humano. Os resultados mostraram que o pep5r é mais estável que o pep5 dentre os parâmetros analisados, além disso, o pep5 mostrou-se mais suscetível a modificações por hidrólise em meios alcalinos. Ambos os peptídeos não sofreram modificações térmica a 37° durante 4 horas de incubação, sendo, necessário um estudo prolongado ou com valores de temperatura maiores para promover a degradação. Os ensaios de degradação em plasma sanguíneo humano mostraram que o pep5 não se encontra integro após 15 minutos, em contrapartida, a massa do pep5r foi encontrada durante todo o período de análise. Portanto, concluímos que apesar dos experimentos terem sido realizados com apenas uma amostragem, os resultados nos possibilitaram a construção de ideias iniciais sobre algumas características relacionadas à estabilidade desses peptídeos, seja por ações do ambiente ou degradação em plasma sanguíneo. Além disso, todos os ensaios iniciais realizados nesse trabalho possibilitam um direcionamento para realização de ensaios futuros visando um eventual registro farmacológico dos peptídeos em questão.
Reference
OLIVEIRA, André Souza de. Ensaios de degradação forçada e degradação em plasma sanguíneo em peptídeos intracelulares com potencial para composição fármacológica. 2020. 60 p. Trabalho de Conclusão de Curso (Especialização em Toxinas de Interesse em Saúde) – Centro de Formação de Recursos Humanos para o SUS/SP; Instituto Butantan, São Paulo, 2020.
Link to cite this reference
https://repositorio.butantan.gov.br/handle/butantan/3716
Issue Date
2020


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