Caracterização bioquímica de uma serinoprotease com efeito ativador do plasminogênio do veneno de Lachesis muta rhombeata
Author
Butantan affiliation
Publication type
Master thesis
Language
Portuguese
Access rights
Restricted access
Appears in Collections:
Abstract
Snake venom serine proteases (SVSPs) are chymotrypsin-like proteins found in some
venoms of the Viperidae family. These enzymes affect physiological processes of their
prey and victims, acting mainly in the hemostatic, fibrinolytic and kinin systems. SVSPs
belong to the PA clan, PA (S) subclan, S1 family and A subfamily of proteolytic
enzymes. This work, describes a SVSP (Lmr-PA) isolated from the venom of Lachesis
muta rhombeata which activates plasminogen. The proteinase was purified by
combination of gel filtration and anionic exchange chromatographies. Its homogeneity
was demonstrated by SDS-PAGE, reverse-phase HPLC, and two-dimensional
electrophoresis. Lmr-PA is a 30-kDa single chain glycoprotein. Its amino acid
sequence (61%) was determined by mass spectrometry on nLC-MS/MS. Lmr-PA
activates plasminogen to release plasmin and degrades the plasmin substrate S-2251
as well as dimethylcasein. PMSF, the specific inhibitor of serine proteases completely
blocked Lmr-PA activity. The proteinase cleaves the Aα chain and partially the Bβ and
γ chains of fibrinogen. In addition the protease degrades laminin, nidogen and type IV
collagen from Matrigel. The enzyme digests fibrin in presence of plasminogen in vitro.
Deglycosylated Lmr-PA loses approximately 26% of its activity. In addition, Lmr-PA
activity is inhibited by α2-macroglobulin at a ratio of 2:1 (α2-M:E) and α2-antiplasmin
inhibits plasmin generated from plasminogen. Lmr-PA does not induce aggregation of
washed human platelets but, aggregates platelets in presence of exogenous fibrinogen
and binds to the platelet receptors glycoproteins (GP) GPIb and GPVI. Our data
indicate that Lmr-PA is a plasminogen activating serine protease, like to previously
reported LV-PA from Lachesis muta muta venom. These results suggested that Lmr-
PA play a role in the pathology of snake envenomation and could be a useful model to study hemostatic disorders caused by snake bites.
Abstract in Portuguese
As serinoproteases do veneno de serpentes (SVSPs) são proteínas semelhantes à
quimotripsina presentes encontradas em alguns venenos da família Viperidae. Essas
enzimas afetam os processos fisiológicos de suas presas e vítimas, atuando
principalmente nos sistemas hemostático, fibrinolítico e cinina. As SVSPs pertencem
ao clã PA, subclan PA (S), família S1 e subfamília A de enzimas proteolíticas. Este
trabalho descreve uma SVSP (Lmr-PA) isolada do veneno de Lachesis muta
rhombeata que ativa o plasminogênio. A proteinase foi purifica por combinação de
cromatografias de filtração em gel e troca aniônica. Sua homogeneidade foi
demonstrada por SDS-PAGE, HPLC de fase reversa e eletroforese bidimensional.
Lmr-PA é uma glicoproteína de cadeia simples de 30 kDa. A sua sequência de
aminoácidos (61%) foi determinada por espectrometria de massa em nLC-MS/MS.
Lmr-PA ativa o plasminogênio para liberar plasmina e degrada o substrato de
plasmina S-2251, bem como a dimetilcaseína. PMSF, um inibidor específico de
serinoproteases bloqueou completamente a atividade da Lmr-PA. A proteinase cliva a
cadeia Aα e parcialmente as cadeias Bβ e γ do fibrinogênio. Além disso, a protease
degrada laminina, nidogênio e colágeno tipo IV de Matrigel. A enzima digere a fibrina
na presença de plasminogênio in vitro. Lmr-PA desglicosilada perde
aproximadamente 26% da sua atividade. Além disso, a atividade da Lmr-PA é inibida
pela α2-macroglobulina em uma proporção de 2:1 (α2-M:E) e a α2-antiplasmina inibe
a plasmina gerada a partir do plasminogênio. Lmr-PA não induz a agregação de
plaquetas humanas lavadas, mas agrega plaquetas na presença de fibrinogênio
exógeno e se liga às glicoproteínas dos receptores plaquetários (GP) GPIb e GPVI.
Nossos dados indicam que a Lmr-PA é uma serinoprotease ativadora do
plasminogênio semelhante a LV-PA relatada anteriormente do veneno de Lachesis
muta muta. Esses resultados sugerem que a Lmr-PA desempenha um papel na
patologia do envenenamento por serpentes e pode ser um modelo útil para estudar
distúrbios hemostáticos causados por acidentes ofídicos.
Link to cite this reference
https://repositorio.butantan.gov.br/handle/butantan/5208
Keywords
Funding agency
Issue Date
2022
Show full item record
The access to the publications deposited in this repository respects the licenses from journals and publishers.
